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當前位置:首頁(yè)產(chǎn)品中心安諾倫自產(chǎn)柱式質(zhì)粒提取試劑盒

柱式質(zhì)粒提取試劑盒

產(chǎn)品簡(jiǎn)介

采用優(yōu)化的SDS-堿裂解法裂解細胞,高效去除抑制物等雜質(zhì),離心吸附柱內的硅基質(zhì)膜在高鹽、低pH值狀態(tài)下選擇性地結合溶液中的質(zhì)粒DNA,并最大限度的去除蛋白質(zhì)、基因組DNA、RNA和其他雜質(zhì),最后在低鹽、高pH的洗脫緩沖液將純凈質(zhì)粒DNA從硅基質(zhì)膜上洗脫,每個(gè)吸附柱可吸附高達50μg的質(zhì)粒DNA。純化的質(zhì)粒DNA可直接用于酶切、PCR、測序、轉化、轉染一些常規的傳代細胞等生物學(xué)實(shí)驗。

產(chǎn)品型號:
更新時(shí)間:2023-12-28
廠(chǎng)商性質(zhì):代理商
訪(fǎng)問(wèn)量:508

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使用步驟

1、取 5-15 mL 過(guò)夜培養菌液加入離心管中,12000 pm 離心 1 min 收集菌體沉淀,盡量吸棄上清。

2、向留有菌體沉淀的離心管中加入 500 uL Buffer P1 (已加入RNase A),使用移液槍或旋振蕩器充分混勻,懸浮菌體沉淀,混勻至無(wú)菌塊。

3、向離心管中加入 500 uL Bufcr P2,溫和上下顛倒混勻 4-6 次,充分混勻使菌體裂解,此時(shí)溶液應變得清亮粘稠。

注意:溫和地混勻,不要劇烈震蕩,以免打斷基因組 DNA。所用時(shí)間不應超過(guò) 5 min,以免質(zhì)粒受到破壞

4、向離心管中加入 700 uL Bufer P3,立即溫和上下顛倒混勻 8-10 次,充分混勻,此時(shí)應

出現白色絮狀沉淀,12000 rpm 離心 10 min。注意: P3 加入后立即混合,避免產(chǎn)生局部沉淀。如果離心完仍有沉淀漂浮,可延長(cháng)離心時(shí)間取上清。

5、將步驟 4 中的上清液分批轉移到已裝入收集管的吸附柱中,12000 rpm 離心 1min,倒掉收集管中的廢液,將吸附柱重新放回收集管中。注意:一根吸附柱最大容積為 750 uL,請分兩次轉移上清液到吸附柱中。

6、向吸附柱中加入 500 uL Bufer PD,12000 rpm 離心 1 min,棄廢液。

7、向吸附柱中加入 600 uL Buffer PW (使用前請確認是否加入無(wú)水乙醇),12000rpm 離心1 min,棄廢液。

注意:加入漂洗液 PW 后,室溫靜置 2-5 min,有助于更好的去除雜質(zhì)。

8、重復一次步驟 7。

9、將吸附柱重新放回收集管中,12,000 rpm 離心 2 min,目的是去除吸附柱中殘余的漂洗液。注意:乙醇殘留會(huì )抑制后續的酶反應,建議將吸附柱開(kāi)蓋,置于室溫放置數分鐘,確保乙醇揮發(fā)干凈。

10、將吸附柱放到一個(gè)干凈滅菌 1.5 L 離心管中,將吸附柱開(kāi)蓋靜置數分鐘。向吸附膜中間位置懸空滴加 50-100 uL Buffer TE 或 ddHO (可提前放在 5565 C水浴鍋中預熱,提高質(zhì)粒 DNA 回收率),室溫放置 2 min。12,000 rpm ,離心 2 min 收集質(zhì)粒 DNA 溶液(若需要獲得最高產(chǎn)量,建議將得到的溶液重新加入離心吸附柱中,重復第 10 步進(jìn)行二次洗脫。)。

11、質(zhì)粒溶液保存在- 20C。


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